太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)精液的超低温保存研究     

韩龙江  黄雯  刘清华  纪利芹  张国范  李军  温海深 《海洋与湖沼》2014,45(5):1085-1091

筛选了六种抗冻保护剂(GLY[甘油],DMSO[二甲基亚砜],PG[丙二醇],EG[乙二醇],DMA[二甲基乙酰胺],MeOH[甲醇])及其五种不同浓度(6%,8%,10%,12%,14%,V/V)、三种稀释液(HBSS溶液,人工海水[ASW],过滤海水[FSW])、四种稀释比例(1︰1,1︰2,1︰4,1︰6)、三种添加剂(蔗糖,葡萄糖,海藻糖)、三个分步降温程序(程序A,程序B,程序C)对太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)精液冷冻保存的影响,成功建立了太平洋牡蛎精液超低温保存方法:以10%DMSO为抗冻保护剂,HBSS溶液为稀释液,1:4的稀释比例,添加海藻糖,采用分布降温法冷冻保存太平洋牡蛎的精液,37°C水浴解冻后精液运动率达到71.27%±3.24%,显著高于其它实验组(P0.05),受精率和孵化率分别达到95.04%±1.99%、93.33%±1.33%,与鲜精(88.89%±15.16%,94.90%±0.95%)、程序冷冻前精液(95.96%±2.15%,92.67%±14.83%)差异不显著(P0.05),证明该太平洋牡蛎精液超低温保存方法可以应用于生产实践和科学研究中。  相似文献   

包埋脱水法超低温保存萱藻(Scytosiphon lomentaria)丝状体的研究     

庄琰  宫相忠  高伟  张文健 《海洋与湖沼》2014,45(5):990-997

以本实验室保存的萱藻(Scytosiphon lomentaria)丝状体为材料,用包埋脱水法超低温保存萱藻丝状体,研究了蔗糖预培养浓度和时间、胶球含水量、化冻温度以及胶球恢复时间对萱藻丝状体存活率和冻存后生长发育能力的影响。结果显示:(1)萱藻丝状体胶球在0.4mol/L的蔗糖溶液中预培养6h能获得最高的存活率;(2)萱藻丝状体胶球的最佳含水量较低,为15%左右,当含水量高于27%时,冻存后的存活率为0;(3)40°C为最适的化冻温度;(4)化冻后,将萱藻丝状体胶球在黑暗条件下恢复18h能显著提高存活率;(5)在最佳条件下,萱藻丝状体经冻存后的存活率最高可达54.79%,恢复后的丝状体与冻存前丝状体并无区别,且经诱导后能够产生正常的孢子囊,放散的孢子可以发育成叶状体。  相似文献   

太平洋鳕(Gadus macrocephalus)精液超低温冷冻方法的建立及精子超微结构分析     

韩龙江  刘清华  于道德  官曙光  纪利芹  王文琪  刘名  温海深  李军 《海洋与湖沼》2014,45(4):789-797

采用分步降温法冷冻保存太平洋鳕(Gadus macrocephalus)精液,并用扫描电镜和透射电镜技术研究了精子的超微结构损伤。分析了添加剂(蛋黄)及五种抗冻剂(PG(丙二醇)、DMSO(二甲基亚砜)、EG(乙二醇)、GLY(甘油)、MeOH(甲醇))不同浓度(8%、10%、12%、14%、16%、18%)对太平洋鳕精子冷冻保存效果的影响。实验结果表明,蛋黄能够显著提高太平洋鳕冷冻保存效果(P0.05);12%PG中添加10%蛋黄保存的冻融精子运动率最高(85.87%±1.6%),显著高于其他冻存组(P0.05)。添加蛋黄的12%浓度的DMSO组解冻后精子运动速率较高,平均直线速度、平均曲线速度、平均路径速度分别达到了(120.39±20.78)μm/s、(120.39±20.78)μm/s、(155.64±12.02)μm/s,与其他各实验组差异显著(P0.05)。通过扫描电镜和透射电镜观察新鲜和冻融后的鳕鱼精子发现,鲜精中75.5%精子形态结构正常、24.5%精子形态结构异常;运动率最高的冻精中67%精子形态结构正常、33%精子形态结构异常。超低温保存对太平洋鳕精子结构产生了显著影响,细胞膜破裂、线粒体肿胀变形,鞭毛脱落、断裂。  相似文献   

鱼类生殖细胞移植技术研究及进展     

周莉  刘清华  李军 《海洋科学》2020,44(8):48-55

鱼类生殖干细胞具有多向分化潜能，作为供体细胞移入同种或异种受体，在受体内迁移、定居、增殖、分化、成熟，产生供体来源功能性配子和后代，称为鱼类生殖细胞移植。作为一项辅助生殖技术，与冷冻保存技术相结合，已经在多种鱼类上进行研究。经过十几年的发展，鱼类生殖细胞移植技术逐渐成熟，目前已经建立了原始生殖细胞、精原细胞、卵原细胞作为供体细胞，囊胚胚胎、孵化幼鱼、成鱼为受体的移植体系。生殖细胞移植技术未来将在濒危物种保护、代理养殖、干细胞诱导分化等方面发挥重要作用。本文总结分析了目前已经报道的鱼类生殖干细胞移植技术，以及鱼类生殖干细胞移植存在的问题和未来发展方向。  相似文献   

海水主要离子在合浦珠母贝精子激活中的作用   总被引：1，自引：0，他引：1  

喻达辉  江世贵  苏天凤  陈竞春 《海洋学报》1999,21(6):134-137

合浦珠母贝(Pinctada fucata)是我国海产珍珠重要母贝,其大批量种苗的人工繁殖于70年代获得成功合浦珠母贝的繁殖生物学有其特殊的地方,即人工解剖获得的精子在自然海水中不运动,没有受精能力,需用一定的化学物质激活才能受精[1-3]。  相似文献   

太平洋牡蛎配子和精子人卵的扫描电镜观察及胚胎发育的初步研究     

田传远  梁英  王如才  任素莲  于瑞海  赵厚均 《海洋科学进展》2000,18(2):51-55

通过扫描电镜观察,太平洋牡蛎精子由头部、中段和尾段组成.精子全长约21.6μm,尾段长约18.2μm,末端观察到"针眼"样结构;头部最大处的直径约2.6μm;中段直径约1.1μm;未成熟精子尾段中部出现膨大,该处直径约0.3μm.卵呈梨形;卵的直径约为41.9μm.卵表面有微绒毛组成的皱折结构,可见卵黄膜孔.卵质收回时,在卵表面卵柄处可见明显的树枝状结构.受精后,受精卵表面的卵黄膜剥离处可见较多数量的皮质小泡.在水温21.2～23.5℃,精卵混合34min时,释时出第1极体;1h22min时,放出第2极体;21h55min时,胚胎发育至初期D形幼虫.  相似文献   

LM神经网络在鱼类胚胎保存抗冻剂毒性试验设计中的应用          下载免费PDF全文

邵磊  肖志忠 《海洋科学》2007,31(7):1-3

采用LM算法神经网络对鱼类胚胎冷冻保存抗冻剂毒性试验数据进行了分析,研究了孵化率和抗冻剂种类、浓度以及平衡时间等因素之间的对应关系,为鱼类胚胎冷冻保存的研究提供了新的分析手段,研究结果表明这一方法行之有效。  相似文献   

红鳍东方鲀精子超低温保存前后的超微结构观察          下载免费PDF全文

于海涛  张秀梅  陈?? 超  李?? 辉 《海洋科学》2007,31(2):17-19

应用透射电镜技术,研究超低温保存前后红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)精子的超微结构。观察发现,受冷冻损伤精子的被膜膨胀、破裂、脱落;线粒体内嵴变形,结构模糊,甚至消失;鞭毛在基部或主段、末段断裂,或被膜膨胀脱落。结果表明,经超低温保存后,部分红鳍东方鲀精子由于膜结构及鞭毛轴丝损伤导致精子活力下降。  相似文献   

秀丽白虾精子结构及生殖进化特征   总被引：3，自引：0，他引：3  

姜叶琴  杨万喜 《海洋学研究》2002,20(2):45-50

用透射电镜技术研究了秀丽白虾精子的形态结构 ,结果表明 :秀丽白虾精子属无鞭毛、单棘型精子。其外形呈图钉样 ,由主体部和棘突构成。主体部包括帽状体、细胞质带和精核。帽状体由约 2 0根辐射状排列的纤丝组成 ,纤丝具横纹。其凸面延伸成棘突 ,棘突内纤丝是帽状体内纤丝的延续 ,亦具横纹。凹面包裹细胞质和精核。细胞质退化 ,无细胞器。精核为非浓缩型 ,核膜不完整。核质呈丝状 ,在凹面及侧面核基质中分布着许多大小不一的膜性泡  相似文献   

超低温保存时间与抗冻剂浓度对真鲷精子质量的影响     

史雪辉  李军 《海洋科学》2007,31(8):85-87

研究了不同浓度的抗冻剂二甲基亚砜（DMSO）和不同保存时间对真鲷（Pagrus major）冻精质量的影响。试验结果表明，DMSO体积分数和保存时间对冻精的受精率、孵化率影响显著。15％二甲基亚砜作为抗冻剂保存10～60d的冻精受精率、孵化率与鲜精无差异，而保存360d的冻精受精率、孵化率开始出现下降。12％，18％，21％DMSO保存60d的冻精受精率差异不显著，均高于90％，而对于保存360d的冻精受精率、孵化率均显著地降低。  相似文献